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抗体是生物化学、细胞生物学和免疫学实验室的重要检测工具。鉴于用于无数应用的抗体和抗体片段种类繁多，有时找到合适的抗体和抗体片段是一项艰巨的任务，更不用说可能危及抗体依赖性实验的广泛问题。交叉反应性、批次间差异以及在未经测试的应用中使用抗体等常见原因被认为是导致结果不一致的原因。在这里，我们分享了一些实验室到实验室的技巧，以选择您研究目的的抗体。

定义您的蛋白质靶标 – 了解蛋白质靶标的生物学特性，因为蛋白质靶标可能非常复杂，并且与相关蛋白质的序列同一性或同源性可能会产生潜在的交叉反应性。使用 GeneCards 等数据库来识别抗原的命名法和任何替代名称，并使用 UniProt 获得目标蛋白质的氨基酸序列。

选择正确的应用程序&苍产蝉辫;– 选择与您的研究最匹配的应用程序。这取决于您需要回答研究问题的数据类型。例如，Western blot 是研究蛋白质浓度的应用;免疫组织化学和免疫细胞化学用于研究定位，因为它们与固定的细胞和组织一起工作;而 ELISA、FACS 和流式细胞术是研究蛋白质相互作用和表达的合适技术。

确保抗体适合您的样品&苍产蝉辫;– 由于靶标的序列和结构因物种而异，因此请使用已针对您感兴趣的物种专门验证的抗体。在这种情况下，请相信数据表：如果抗体已针对一种物种进行了验证，则无法保证它对其他物种有效。

选择兼容的抗体 – 不应假设已证明可在一种应用中检测靶标的抗体在其他应用中也能检测到靶标。免疫化学应用依赖于使用敏感和高度特异性的抗体。更具体地说，它们取决于抗原识别靶蛋白的能力。为了实现有效的抗原-抗体相互作用，表位必须易于结合。有时抗原可能需要靶蛋白以天然和折叠形式存在，或以变性形式存在。

通过固定、pH 值变化或在凝胶电泳制备过程中，表位可能会发生变化，这可能会影响其与抗体相互作用的能力。例如，在 IHC 研究中，抗体可以识别冰冻组织切片中的表位，但该表位可能无法在已变性以进行 Western 印迹分析的样品中获得。

选择宿主物种&苍产蝉辫;– 通常，建议避免使用与目标样品物种相同的宿主抗体物种，以避免干扰免疫球蛋白。选择宿主物种时，请考虑针对一抗的宿主物种产生的二抗，并根据应用进行选择。

研究产物数据表并准备好优化您的方案&苍产蝉辫;– 产物数据表通常包含许多重要细节，包括免疫原的描述、表位的性质、宿主物种、交叉反应性和推荐的起始稀释度。因此，在设置方案时需要考虑许多因素，例如封闭缓冲液、抗体稀释剂、孵育步骤的长度和检测方法。所有这些额外的细节将帮助您优化实验方案以实现成功的分析。

始终包括实验对照 – 在规划实验时，对照是有助于了解结果是成功还是失败的关键部分。大多数常见的实验技术需要特定的控制来帮助解释数据。例如，Western 印迹应始终包含上样对照，而 IHC 和 IF 应始终具有多个阴性对照，以帮助区分信号与背景噪音。

阳性对照的示例可能包括重组蛋白或由已知可产生可检测靶标水平的细胞系制备的裂解物;而阴性对照可能包括使用敲除样品或省略一抗，这两者都可以检测到二抗引起的背景染色。

总之，尽管找到适用于特定应用的抗体有时仍然是一项艰巨的任务，但我们希望这些提示和指南能为您的搜索提供一些有用的起点。