qPCR 探针的多种不同填料为科学家在检测开发过程中提供了丰富的选择。锁定核酸 (LNA)、小沟结合物 (MGB) 和 BHQplus™ 探针均可增强双链体稳定性,这有助于您的检测获得高信噪比,同时保持寡核苷酸长度相当紧凑。它们还能够更好地适应具有挑战性的靶标,如富含 A-T 的序列。但每种探针类型的化学性质意味着您将获得最佳的检测性能 – 信噪比、检测限 (LOD) 等。– 当您将探头类型与应用程序匹配时。
MGB 探针适用于检测 SNP 和困难的基因表达靶标
MGB 探针的长度通常为 8-30 个碱基,5' 端有一个荧光团,3' 端有一个淬灭基团。3' 末端也连接到一个化学部分 - MGB - 该化学部分与双链 DNA 的小沟非共价结合。
由于 MGB 附着在寡核苷酸的末端,因此易于设计 - 只需使用与目标区域互补的寡核苷酸序列即可。这使得 MGB 探针成为检测 SNP 和困难的基因表达靶标(例如富含 A-T 含量的序列)的理想选择。
然而,虽然设计可能很简单,但熔融温度 (Tm) 无法进行微调。
LNA,也称为桥式核酸,是经过修饰的碱基,其中糖的 2' 氧和 4' 碳与亚甲基桥共价连接。
含有 LNA 的探针如何工作?当使用一个或多个 LNA 代替未修饰的单体时,探针-靶标双链体的稳定性得到增强。 双工稳定化的量取决于许多因素,包括使用的 LNA 数量以及 LNA 在探针中的位置。因此,您可以微调 LNA 探针的设计,以达到所需的特异性和稳定性水平。
LNA 探针适合哪些应用?什么时候应该使用 LNA 探头?虽然设计比 MGB 探头稍微复杂一些,并且需要迭代测试以微调性能和 Tm,LNA 探针可以提供更好的特异性和对非靶序列的区分度。 它们非常适合需要高特异性的应用。
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对用于 SYBR Green 检测的 LNA 增强引物感兴趣?除了提供 LNA 探针外,Biosearch Technologies 还合成具有内部 LNA 修饰的定制寡核苷酸。
与 LNA 探针一样,BHQplus 探针利用化学修饰的单体来增强探针-靶标双链体的稳定性和特异性。
然而,BHQplus 探针中使用的专有化学成分与 LNA 不同,这为科学家提供了另一种探针化学选择。
与 LNA 探针一样,BHQplus 探针非常适合需要高灵敏度和特异性的应用。它们为 LNA 探头技术提供了一种更易于设计且价格更具竞争力的替代方案,当您不需要微调探头性能时,它是一个不错的选择。
虽然我们已经强调了使每种探针化学成分大放异彩的具体优势,但其中有很多重迭,您可能希望在检测开发过程中试用每种类型的探针。