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如何选择最佳的 qPCR 探针化学试剂

更新时间:2025-03-28&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;点击次数:215

让应用程序成为您在 LNA、MGB 和 BHQplus 之间做出决定的指南 

qPCR 探针的多种不同填料为科学家在检测开发过程中提供了丰富的选择。锁定核酸 (LNA)、小沟结合物 (MGB) 和 BHQplus™ 探针均可增强双链体稳定性,这有助于您的检测获得高信噪比,同时保持寡核苷酸长度相当紧凑。它们还能够更好地适应具有挑战性的靶标,如富含 A-T 的序列。但每种探针类型的化学性质意味着您将获得最佳的检测性能 – 信噪比、检测限 (LOD) 。– 当您将探头类型与应用程序匹配时。

 

MGB 探针适用于检测 SNP 和困难的基因表达靶标

 

什么是 MGB 探头?

MGB 探针的长度通常为 8-30 个碱基,5' 端有一个荧光团,3' 端有一个淬灭基团。3' 末端也连接到一个化学部分 - MGB - 该化学部分与双链 DNA 的小沟非共价结合。

MGB 探针如何工作?

使用 MGB 探针时,MGB 与探针-靶结构的小沟的结合增强了双链体的稳定性。

 

MGB_probe_with_EDQ_illustration

 

 

 

 

图 1.MGB 探针是双标记的 5′ 水解探针,由 5′ 荧光报告染料和 3′ Eclipse 暗淬灭基团 (EDQ) 组成,与 MGB 部分偶联。

 

MGB 探针适合哪些应用?什么时候应该使用 MGB 探头?

由于 MGB 附着在寡核苷酸的末端,因此易于设计 - 只需使用与目标区域互补的寡核苷酸序列即可。这使得 MGB 探针成为检测 SNP 和困难的基因表达靶标(例如富含 A-T 含量的序列)的理想选择。

然而,虽然设计可能很简单,但熔融温度 (Tm) 无法进行微调。

LNA 探针是需要高特异性和灵敏度的应用的理想选择

 

什么是 LNA?

LNA,也称为桥式核酸,是经过修饰的碱基,其中糖的 2' 氧和 4' 碳与亚甲基桥共价连接。

一个

Unmodified DNA

B

Locked nucleid acid - LNA

 

图 2.A) 未修饰的核苷酸和 B) 锁定的核酸修饰的示意图。

 

含有 LNA 的探针如何工作?

当使用一个或多个 LNA 代替未修饰的单体时,探针-靶标双链体的稳定性得到增强。

双工稳定化的量取决于许多因素,包括使用的 LNA 数量以及 LNA 在探针中的位置。因此,您可以微调 LNA 探针的设计,以达到所需的特异性和稳定性水平。

 

LNA 探针适合哪些应用?什么时候应该使用 LNA 探头?

虽然设计比 MGB 探头稍微复杂一些,并且需要迭代测试以微调性能和 Tm,LNA 探针可以提供更好的特异性和对非靶序列的区分度。

它们非常适合需要高特异性的应用。

 

 

对用于 SYBR Green 检测的 LNA 增强引物感兴趣?除了提供 LNA 探针外,Biosearch Technologies 还合成具有内部 LNA 修饰的定制寡核苷酸。

BHQplus 探针是需要高特异性和灵敏度的应用的替代选择

 

什么是 BHQplus 探头?

与 LNA 探针一样,BHQplus 探针利用化学修饰的单体来增强探针-靶标双链体的稳定性和特异性。

然而,BHQplus 探针中使用的专有化学成分与 LNA 不同,这为科学家提供了另一种探针化学选择。

 

BHQplus 探头的工作原理是什么?

单个 BHQplus 单体的化学修饰可稳定探针-靶标双链体。这使您可以设计更短的探针,与用未修饰的单体制成的探针相比,具有更高的灵敏度和特异性。


BHQplus_probe

图 3.BHQplus 探针使用修饰的核苷酸来增强稳定性。它们被设计得更短(15-25 个碱基),以增强特异性并改善错配鉴别。

 

BHQplus 探头适合哪些应用?什么时候应该使用 BHQplus 探头?

与 LNA 探针一样,BHQplus 探针非常适合需要高灵敏度和特异性的应用。它们为 LNA 探头技术提供了一种更易于设计且价格更具竞争力的替代方案,当您不需要微调探头性能时,它是一个不错的选择。

在探针化学的选择中进行选择

虽然我们已经强调了使每种探针化学成分大放异彩的具体优势,但其中有很多重迭,您可能希望在检测开发过程中试用每种类型的探针。



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